|
Прямое определение количества ферментного белка в тканях является чрезвычайно трудной задачей. Для этого необходимо выделить фермент в чистом виде, что сделать также очень трудно, поскольку ферменты содержатся в тканях в очень малых количествах и часто прочно связаны с различными клеточными структурами.
В практике повседневных исследований обычно определяют активность ферментов. Количество фермента и его активность — это в принципе не равнозначные понятия, так как часть фермента может быть частично или полностью ингибирована и не проявлять своей активности. Однако на практике это не столь существенно, ибо непосредственный интерес представляет именно та часть фермента, которая проявляет свою каталитическую активность в момент исследования.
Принцип определения активности фермента состоит в том, что об его активности судят по производимому им действию — по скорости исчезновения субстрата (или субстратов) или по скорости накопления продуктов реакции. Количество образующихся или вступающих в реакцию в течение всего ферментативного процесса химических соединений определяют обычно различными методами аналитической химии. Таким образом, аналитические методы определения субстратов или продуктов реакции лежат в основе определения активности ферментов.
За единицу активности фермента принимается такое его количество, которое способно вызвать превращение одного микромоля субстрата в минуту при 25° С в оптимальных условиях. К последним, как уже отмечалось, относятся оптимальные значения температуры и рН, соответствующий специфичности фермента субстрат и его концентрация, достаточная для насыщения им фермента. Таким образом, при определении активности любого фермента все эти условия должны быть строго соблюдены.
Перед заливкой форму с подшипником устанавливают на лист стали и подогревают на горне или в электропечи до температуры 200—250°С, после чего ее заливают с небольшой высоты непрерывной струей расплавленного баббита.
Форму разбирают только после охлаждения баббита. Качество заливки определяют легкими ударами молотка. При хорошем схватывании и удовлетворительном качестве заливки вкладыш издает чистый и звонкий металлический звук без дребезжания; поверхность заливки должна быть тускло-серебристой.
После заливки вкладыши растачивают на токарном станке и пришабривают по шейке вала с проверкой прилегания по краске.
.......................................................................................................................... |
